Informacije

Promoter u lac operonu

Promoter u lac operonu


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

evo pitanja:

Pretpostavimo da eksperimentator postane vešt sa tehnikom koja joj omogućava da pomera sekvence DNK unutar prokariotskog genoma. Ako ona pomakne promotor za lac operon u regiju između gena beta galaktozidas i gena permeaze, što bi od sljedećeg bilo vjerovatno?

evo odgovora:

Proizvodit će se beta galaktozidaza.

Moje pitanje za vas glasi: zašto je to tako? Nemam pojma odakle je došao ovaj zaključak. Hvala.


Pošto je @biogirl dao odgovor, dodaću svoje mišljenje:

β-galaktozidaza bi se eksprimirala, ali permeaza i transacetilaza ne bi.

Operator leži u blizini/blago preklapa promotor, uzvodno od lacZ gena. Vezivanje potiskivača za operatora blokira promotor, a indukcija teoperona uključuje potiskivač ostavljajući operatora nezauzetim. Ako ste precizno izrezali operatora i transplantirali ga između gena lacZ i lacY, onda mislim da bi se promotor konstitutivno eksprimirao dovodeći do sinteze β-galaktozidaze, ali bi operater blokirao polimerazu da transkribira gen permeaze. U ovom pogledu operater bi se ponašao više kao terminator.

Zatim, ako bi se dodao induktor, to bi umanjilo učinak transplantiranog operatora, a nizvodni geni bi se transkribovali. Čak je moguće da je ovaj eksperiment izveden negdje u posljednje tri decenije.

dodato kasnije:

OP je sada uredio pitanje na način da moj odgovor, a odgovor od @biogirl, učini besmislenim. Originalna formulacija odnosila se na premještanje "lac operona", a ne "lac promotora", stoga moje pitanje u komentaru traži "operon" ili "operator"?

Ovdje ću ostaviti svoj odgovor, ali ovo pitanje je sada toliko kompromitovano da savjetujem svima da jednostavno zaborave na njega.


Vjerujem da bi odgovor trebao biti da je izražen prodor.

Kao što se može vidjeti na slici, ako se operator kreće između Z gena i Y gena, Y gen treba eksprimirati i treba napraviti permeazu.


16.1: Lak Operaon

  • Doprinijeli Todd Nickle i Isabelle Barrette-Ng
  • Profesori (biologija) na Univerzitetu Mount Royal i Univerzitetu amp u Calgaryju

Rani uvid u mehanizme transkripcijske regulacije došao je iz studija o E. coli istraživači Francois Jacob & Jacques Monod. U E. coli, i mnoge druge bakterije, geni koji kodiraju nekoliko različitih proteina mogu se nalaziti na jednoj jedinici za transkripciju zvanoj an operon. Geni u operonu dijele istu regulaciju transkripcije, ali se prevode pojedinačno. Eukarioti općenito ne grupiraju gene zajedno kao operoni (izuzetak je C. elegans i nekoliko drugih vrsta).


Regulacija Arabinose Operona

Arabinozni operon je reguliran i pozitivno i negativno, kao model Lac-operona.

Pozitivna regulacija

Evo, termin pozitivno ukazuje na to da će doći do sinteze mRNA. Stoga se ara BAD mRNA formira u pozitivnoj regulaciji. Arabinozni operon je pozitivno regulisan sa dva uslova koja su objašnjena u nastavku:

Slučaj-I (kada nema ni proteina induktora ni represatora):

Neće biti potiskivanja arabinoznog operona u odsustvu i induktora i proteina represora. U ovom stanju, RNA polimeraza će se vezati za specifičnu promotorsku regiju i transkribovati ara-BAD gene da bi formirala mRNA. Ali u ovom slučaju, stopa transkripcije mRNA je mnogo sporija.

Slučaj-II (kada su prisutni i induktor i represor):

Induktor (arabinoza) će se vezati za protein represor kako bi regulirao transkripciju mRNA. Ara-C protein plus arabinoza formira kompleks koji neće dozvoliti stvaranje petlje. Arabinoza se veže za Ara-C dimer i mijenja njegovu strukturnu konfiguraciju. Ova promjena u strukturnoj konfiguraciji će omogućiti RNA polimerazi da transkribira ara-BAD gene kako bi formirala mRNA. MRNA će se dalje prevesti u proteine.

Negativna regulacija

Evo, termin negativan ukazuje da se transkripcija mRNA neće dogoditi. Da bismo razumjeli proces na jednostavan način, uzmimo uslov III da ga uporedimo sa prethodna dva uslova.

Slučaj III (kada je prisutan samo represorski protein):

Glavna uloga arabinoznog operona uključuje razgradnju arabinoze. U nedostatku arabinoze neće biti transkripcije i translacije molekula DNK. Arabinoza djeluje kao induktor, koji veže i inaktivira represorski protein ARA-C. U nedostatku induktora, protein represor će proizvesti gen ara-C. Protein represor ARA-C tvori dimer s operatorom i genom induktorom tvoreći a petlja. Formiranje petlje neće dozvoliti RNA polimerazi da transkribuje ara-BAD gene da formira mRNA.


Regulacija ekspresije gena u prokariota (sa dijagramom)

(ii) Oni koji se sintetiziraju tek nakon određene stimulacije. Prvi tip je nazvan konstitutivno sintetiziran, a drugi inducibilni enzimi.

Analizirajući različite E. coli koji su bili defektni za indukciju enzima koji koriste laktozu, Jacob i Monod su pogodili mogući molekularni mehanizam koji kontrolira represiju i de-represiju niza gena. E. coli zahtijeva skup od tri gena da bi mogla metabolizirati laktozu. Kada se malo laktoze doda u medij za rast bez glukoze, vidljivo je da se ove tri gena koji koriste laktozu (lac geni) nazvane lac z, lac y i lac a sintetiziraju istovremeno.

Produkt lac z je enzim β-galaktozidaza koji katalizira pretvorbu laktoze u galaktozu i glukozu. Ovi geni su izraženi u odsustvu laktoze. Jacob i Monod (1961) predložili su operonski model za objašnjenje genetske osnove indukcije i represije lac gena u prokariota. Za ovo djelo dobili su Nobelovu nagradu 1965. godine.

Operon:

1. Otvori su segmenti genetskog materijala (DNK) koji funkcioniraju kao regulirana jedinica koja se može uključiti ili isključiti.

2. Operon se sastoji od najmanje četiri tipa gena: regulator, operator, promotor i strukturni (slika 8.4.A).

3. Regulatorni gen je gen koji formira biohemiju za suzbijanje aktivnosti operatorskog gena.

4. Operatorski gen je gen koji prima proizvod regulatornog gena. Omogućava funkcioniranje operona kada nije pokriven biokemikalijama koje proizvodi regulatorni gen.

5. Funkcionisanje operona se zaustavlja kada se pokrije operatorski gen.

6. Promotorski gen je gen koji osigurava tačku vezivanja za RNA polimerazu potrebnu za transkripciju strukturnih gena.

7. Strukturni geni su geni koji prepisuju mRNA za sintezu polipeptida.

8. Operaon može imati jedan ili više strukturnih gena, npr. 3 u lac operonu, 5 u triptofanskom operonu, 9 u histidinskom operonu.

9. Polipeptidi mogu postati sastavni dio strukturnih proteina, enzima, transportnih proteina, hormona, antitijela itd. Neki strukturni geni također tvore nekodirajuće RNK.

10. Mehanizam regulacije sinteze proteina primjenom operonskog modela može se ilustrirati pomoću dva primjera (lac i amp triptofan) u bakterijama. ”

Inducibilni operonski sistem (indukcija operona):

1. Inducibilni operonski sistem je (a) regulisani operonski sistem u kojem strukturni geni ostaju isključeni sve dok induktor nije prisutan u medijumu. (Sl. 8.4B)

2. Javlja se u kataboličkim putevima.

3. Lac operon Escherichia coli je inducibilni operonski sistem koji su otkrili Jacob i Monod (1961).

4. Lac operon Escherichia coli ima tri strukturna gena, z, y i a.

5. U induciranom operonu strukturni geni transkribiraju policistronsku mRNA koja proizvodi tri enzima. To su β-galaktozidaza, galaktozidna permeaza i galaktozid acetilaza.

6. β-galaktozid dovodi do hidrolize laktoze ili galaktozida u obliku glukoze i galaktoze.

7. Galaktozidna permeaza je potrebna za ulazak laktoze ili galaktozida u bakteriju.

8. Galaktozid acetilaza je transacetilaza koja može prenijeti acetilnu grupu u β-galaktozid.

9. Inicijacijski kodon strukturnog gena z je TAG (odgovara AUG mRNA) i nalazi se 10 parova baza dalje od kraja gena operatera.

10. Supstanca čiji dodatak izaziva sintezu enzima naziva se induktor.

11. Induktor je hemikalija koja se vezuje za represor i menja oblik mesta vezivanja operatera tako da represor više ne ostaje vezan za operatera.

12. U lac operonu alolaktoza je stvarni induktor, dok je laktoza očigledni (vidljivi) induktor.

13. Induktori koji induciraju sintezu enzima bez metabolizma nazivaju se besplatni induktori, npr. IPTG (Izopropil tiogalaktozid).

14. Regulatorni gen (gen) proizvodi mRNA koja sintetiše biohemijski represor.

15. Represor je mali protein formiran od regulatorskog gena koji se veže za gen operatora i blokira strukturni enzim provjeravajući tako sintezu mRNA.

16. Represor lac operona je tetramerni protein molekulske mase 1, 60.000. Sastoji se od 4 podjedinice svaka čija je molekulska težina 40.000.

17. Protein represor ima dva mjesta, glavu za pričvršćivanje na gen operatera i utor za pričvršćivanje induktora.

18. Promotorski gen funkcioniše kao tačka prepoznavanja RNA polimeraze. RNA polimeraza se u početku vezuje za ovaj gen. Postaje funkcionalan tek kada je u stanju da pređe preko gena operatora i dođe do strukturnih gena.

19. Operatorski gen kontroliše ekspresivnost operona. Obično je isključen zbog vezivanja represora preko njega.

20. Međutim, ako induktor povuče represor, gen dopušta prolazak RNA polimeraze iz promotorskog gena u strukturni gen.

21. U lac operonu operatorski gen je mali, dug 27 parova baza. Gen je napravljen od palindromskih ili samokomplementarnih sekvenci.

22. Ako se doda laktoza, represor postaje neaktivan tako da se ne može vezati za gen operatera i dolazi do sinteze mRNA.

23. Transkripcija je pod negativnom kontrolom kada je lac represor deaktiviran induktorom.

24. Transkripcija u lac operonu je pod pozitivnom kontrolom preko proteina cikličkog AMP receptora (CAP).

25. Protein aktivatora gena katabolita (Cga protein) ili ciklički protein AMP receptora (CAP) veže se za mjesto Cga.

26. Kada se CAP spoji na mjesto vezivanja, promotor postaje jači.

27. CAP se veže samo na mjesto vezivanja kada je vezan s cAMP.

28. Kada je nivo glukoze visok, cAMP se ne javlja pa se CAP ne veže, pa se RNA polimeraza ne veže, što rezultira niskom transkripcijom.

29. Lac operon, međutim, neće ostati operativan neograničeno dugo unatoč prisutnosti laktoze u vanjskom okruženju.

30. Prestat će svoju aktivnost nakupljanjem glukoze i galaktoze u stanici izvan kapaciteta bakterije za njihov metabolizam.

Reprezentativni Operon sistem (Potiskivanje Operona npr. Triptofan Operon iz E.coli):

1. Represivni operonski sistem je regulirani segment genetskog materijala koji normalno ostaje u funkciji, ali se može isključiti kada njegov proizvod ili nije potreban ili prelazi graničnu vrijednost.

2. Ovaj sistem se obično nalazi u anaboličkim putevima.

3. Triptofan operon iz Escherichia coli je jedan takav represivni operonski sistem. (Sl. 8.5).

4. Triptofan operon ima 5 strukturnih gena – E, D, C i B A.

5. Gen E i D kodira enzim antranilat sintetazu, gen C za glicerol fosfat sintetazu, gen B za β podjedinicu sinteze triptofana i A za α podjedinicu sinteze triptofana.

6. Regulatorni gen (trp-R) proizvodi biohemijsku, općenito bjelančevinsku tvar, zvanu aporepresor.

7. Aporepresor sam ne može blokirati gen operatera zbog nedostatka vezne glave. Zbog toga operonski sistem ostaje uključen.

8. Potpuni potiskivač nastaje tek kada se ne-proteinski jezgri pridruži aporepresoru,

9. Corepressor je ne-proteinska komponenta ili represor koji je također krajnji proizvod reakcije katalizirane enzimima proizvedenim djelovanjem strukturnih gena.

10. On (corepressor) se kombinuje sa aporepresorima i formira represor koji zatim blokira gen operatera za isključivanje operona.

11. Strukturni geni zaustavljaju transkripciju i fenomen je poznat kao povratna represija.

12. Korepresor triptofanskog operona je aminokiselina triptofan.

13. Kod triptofana represorski gen nije u blizini promotora, već se nalazi u drugom dijelu genoma E. coli.

16. Promotorski gen (trp-P) je prepoznavanje kao i inicijaciona tačka za RNA polimerazu. RNA polimeraza se veže za gen promotora. Može preći u strukturne gene pod uvjetom da je operacijski gen u funkcionalnom stanju.

17. Operatorski gen (trp-O) leži na putu između promotora i strukturnih gena. Obično ostaje uključen tako da RNA polimeraza može prijeći iz promotorskog gena u strukturni gen i dovesti do transkripcije.

18. Operatorski gen se može isključiti kada se i aporepressor i corepressor spoje zajedno da formiraju represor. Represor se vezuje za operatorski gen kako bi prekinuo kretanje RNK polimeraze.

19. U nedostatku triptofana, RNA polimeraza se vezuje za mjesto operatera i na taj način se transkribiraju strukturni geni.

20. Transkripcija strukturnog gena dovodi do proizvodnje enzima (sinteza triptofana) koji sintetiše triptofan.

21. Kad triptofan postane dostupan, enzimi za sintezu triptofana nisu potrebni, ko-represor (triptofan) i#8211 represivni kompleks blokira transkripciju.

22. Jedan element triptofanskog operona je vodeća sekvenca ‘L’ koja je odmah 5′ kraj trp. E gen.

23. Ova ‘L’ sekvenca kontroliše ekspresiju operona kroz proces koji se naziva atenuacija.

24. Atenuacija je prestanak preuranjenosti transkripcije u vodećoj regiji.

25. Triptofan operon je negativna kontrola.

Dva gore opisana modela operona mogu se sažeti na sljedeći način:

Aktivni represor + rukovalac → Sistem ISKLJUČEN

Aktivni potiskivač + induktor = Neaktivni potiskivač → Sistem UKLJUČEN

(ii) Represivni sistem:

Apo-represor i kompleks su-represora = Aktivni represor → Sistem je isključen

Apo-represor = Neaktivan potiskivač → Sistem UKLJUČEN

Važnost regulacije gena:

1. Postoje dvije vrste djelovanja gena – konstitutivne i regulirane.

2. Konstitutivno djelovanje gena događa se u onim sistemima koji rade cijelo vrijeme i ćelija ne može živjeti bez njih, npr. Glikoliza. Ne zahtijeva represiju. Stoga, regulatorni i operacijski geni nisu povezani s njim.

3. U reguliranom djelovanju gena svi geni potrebni za višestupanjsku reakciju mogu se istovremeno uključiti ili isključiti.

4. Geni se uključuju ili isključuju kao odgovor na određene kemikalije potrebne za metabolizam ili nastaju na kraju metaboličkog puta.

5. Za rast, podjelu i diferencijaciju stanica potrebna je regulacija gena. Dovodi do morfogeneze.


U genomima prokariota, grupe strukturni geni srodne funkcije često su povezane zajedno, a njihov izraz kontrolira jedan skup regulatorni elementi . Ovi genski “snopovi” se nazivaju operoni. Operaoni su efikasan način da se pojednostavi ekspresija gena kod prokariota. U ovom modulu ćemo posebno pogledati# Escherichia coli lac operon, koji se često koristi kao modelni sistem u genetici i ima stvarne, praktične primjene u molekularnoj biologiji.

1. Lac operon

1.1 Struktura

Lac operon sadrži tri enzima kodirajuća strukturna gena i tri regulatorna elementa. Enzimi rade zajedno kako bi omogućili E. coli za varenje disaharida laktoza , a regulatorni elementi kontroliraju transkripciju ovih enzima.

Ovi kodirajući geni uvijek dolaze određenim redoslijedom unutar operona, a tokom transkripcije, svi se zajedno transkribiraju na jedan polikistronska mRNA strand. Molimo vas da detaljno istražite sliku 1 klikom na ikone “? ” da biste se upoznali s ključnim regulatornim elementima, strukturnim genima i proteinskim proizvodima lac operona.

1.2 Regulatorni elementi

  • Repressor (I): Kodirajuća sekvenca za protein represor. Protein represor je a trans-regulatorni element , a njegova transkripcija regulirana je potpuno odvojenim skupom regulatornih sekvenci.
  • Promoter (P): Nekodirajuće cis-regulatorni element . RNA polimeraza (RNApol) mora se vezati za promotorsku regiju kako bi započela transkripcija mRNA.
  • Operater (O): Nekodirajući cis-regulatorni element. Sadrži vezno mjesto za protein represor I. Kada I je vezan za operatora, RNA polimeraza se ne može vezati za promotor.

1.3 Strukturni geni

  • Beta-galaktozidaza (lacZ): Kodirajuća sekvenca za beta-galaktozidazu, enzim koji uzima laktozu kao supstrat i cijepa je u monosaharide galaktozu i glukozu. Ovo su prve reakcije neophodne za razgradnju laktoze.
  • Permease (lacY): Kodirajuća sekvenca za permeazu, membranski vezan protein koji omogućava laktozi da uđe u ćeliju.
  • Beta-galaktozid transacetilaza (lacA): Kodirajuća sekvenca za beta-galaktozid transacetilazu, enzim koji dodaje acetilne grupe laktozi i drugim šećerima koji sadrže galaktozu. Uloga ovog enzima u probavi laktoze nije dobro definirana i uglavnom ćemo ga izostaviti iz naših modela lac operona.

Slika 1: Lac operon

Kliknite na ikone “? ” na ovoj slici da vidite više informacija o sastavnim dijelovima operona.

2. Funkcija

Na slici 1 možemo vidjeti da lac operon koordinira transkripciju tri enzima sa srodnim funkcijama. Ovo je očito vrlo praktično, ali prava ljepota ovog sistema leži u činjenici da osigurava da se ti geni samo transkribiraju pod specifičnim uslovima okoline.

Laktoza je relativno rijedak šećer, i to većina E. coli ne treba stalno proizvoditi enzime beta-galaktozidaze i permeaze. Srećom po E. coli, lac operon aktivira se samo u prisustvu laktoze! Pogledajte ovaj kratki video zapis, zahvaljujući Virtual Cell -u, kako biste vidjeli kako se to postiže:

Da biste razumjeli ovaj video, potrebno vam je dobro razumijevanje transkripcija gena i translacija mRNA. Ako vam se nešto u ovom videu čini nepoznatim, odvojite malo vremena da osvijestite ove teme.

Video napomene:

  • U ovom videu Virtualna ćelija nikada se posebno ne odnosi na regije operatora i promotora, umjesto toga odlučuje ih spojiti u jedan regulatorni element koji se zove “Controlling region ”. Za ovaj kurs morate ih uzeti u obzir kao zasebne elemente unutar operona.
  • Zapamtite, iako to nije eksplicitno navedeno u ovom videu, lacA se uvijek prepisuje i prevodi zajedno sa lacZ i lacY. Funkcija ovog genskog proizvoda je još uvijek nejasna, pa je izostavljena iz većine obrazovnih resursa.

Nadajmo se da vam je ovaj video dao osnovnu ideju o tome kako funkcionira lac operon. U odjeljku 3 ćemo dublje proučiti kako pojedine komponente operona međusobno djeluju razmatrajući šta se događa ako se jedna ili više njih promijeni mutacijom.

3. Mutacije

U molekularnoj biologiji jedna od najčešćih metoda za utvrđivanje funkcije gena je mutiranje i mjerenje rezultirajućih učinaka na njegov organizam. U ovom odjeljku ćemo razmotriti različite mutacije koje se mogu pojaviti u genima lac operona i raspravljati o učincima tih mutacija na E. coli. Da bismo to učinili, koristit ćemo sljedeće simbole za predstavljanje pojedinačnih komponenti lac operona:

U ovom modelu, svi genetski elementi u operonu poredani su u istoj orijentaciji kao i u stvarnoj E. coli genom (vidi sliku 1). Budući da je funkcija lacA još nije dobro definirano, češće ćemo ga izostavljati iz ovog modela. Kad su sve sekvence divlji tip , lac operon funkcionira normalno. Ovo ćemo predstaviti koristeći sljedeću notaciju:

Ako je određeni gen mutiran, mi ćemo promijeniti gornji indeks iznad tog gena. U nastavku su navedene specifične mutacije koje ćemo gledati na ovom kursu:

  • Null mutacija: Označeno sa X – (gdje X može biti bilo koji genetski element na operonu), DNK sekvence sa ovom mutacijom potpuno su izgubile svoju normalnu aktivnost. U genima koji kodiraju proteine, to znači da se protein ne proizvodi. U regulatornim genima, to znači da su redovna mjesta vezivanja nefunkcionalna (tj. RNApol vezujuće mjesto u promotorskoj regiji i RNApol vezno mjesto u regiji operatera).
  • Konstitutivna djelatnost: Označeno sa O c, ova mutacija je specifična za operatorsku regiju. Konstitutivno aktivne regije operatora uvijek blokiraju vezivanje proteina represora za područje operatora. To dovodi do transkripcije operona bez obzira na to je li prisutna laktoza ili ne, jer represor nije u stanju blokirati vezanje RNApola za promotor.
  • Super-represor: Označeno sa I s , ova mutacija je specifična za gen koji kodira represor. Geni super-represori proizvode posebne represorske proteine, koji se i dalje mogu vezati za operatora, ali ne i za laktozu.

U sljedećim vježbama razmotrit ćemo što se događa u tipičnom haploidu E. coli kada dođe do nekih od ovih mutacija. Kao savjet, zapamtite da svi regulatorni elementi u operonu moraju normalno funkcionirati prije nego što se bilo koji strukturni geni mogu transkribirati.

4. Merodiploidi

Obično predstavljamo E. coli i drugi prokarioti kao potpuno haploidni, sa samo jednim kružnim hromozomom i samo jednom kopijom svakog gena. Možda se, međutim, sjećate iz našeg poglavlja genetika prokariota da to nije uvijek slučaj. Bakterije, uključujući E. coli, mogu nabaviti DNK iz svoje okoline (translacija), iz faga (transdukcija) ili iz drugih bakterija (konjugacija). Ovo može rezultirati E. coli sa dvije kopije određenih gena! Ove djelomično diploidne nazivamo prokariotima merodiploidi (“mero-” dolazi od grčke riječi za “part ”, ili “partial ”). Merodiploidi se mogu proizvesti u laboratorijskim uvjetima, koristeći sojeve Hfr/F+ E. coli.

Merodiploid E. coli su fantastičan istraživački alat. Omogućuju nam da ispitamo kako interakcije alela divljeg tipa i mutiranih djeluju unutar živog organizma, sa svim dodatnim bonusima rada sa E. coli (brza reprodukcija/rast, lako održavanje kolonija itd.) U ovom modulu ćemo predstavljati merodiploide koristeći sljedeće oznake:

U ovom zapisu prikazani smo hromozomski lac operon i Hfr plazmid lac operon jedan pored drugog. Opet smo uključili lacA gen za potpunost, ali izostavit će ga iz naših vježbi.

Budući da merodiploidi imaju dvije kopije datog skupa gena, mutacije na njih različito utječu. Na primjer, ako je jedna kopija gena za kodiranje proteina inaktivirana, druga kopija može nastaviti proizvoditi održiv protein, učinkovito maskirajući mutaciju.

Isprobajte svoje razumijevanje pomoću sljedećeg niza vježbi:

5. Regulatori i efekti

U Odeljku 2 smo videli da lac operon ima ugrađen senzor za laktozu: protein represor. Kada nema prisutne laktoze, represor sprječava prevođenje proizvoda lac operona vezanjem za područje operatora. Kada laktoze ima u okolini u velikim količinama, ćelija je apsorbira i veže za potiskivač, uklanjajući njegovu sposobnost vezanja za područje operatora. Općenito, bilo koju molekulu koja na ovaj način mijenja funkciju proteina nazivamo an efektorski molekul. Da bi bio pravi efektor, molekula mora modificirati aktivnost proteina#8217s selektivnim vezanjem na alosterično mjesto .

U terminima molekularne biologije, rekli bismo da je protein represor a negativni regulator lac operona, jer njegovo vezivanje za operon smanjuje transkripciju. Nasuprot tome, a pozitivni regulator bio bi molekul koji se veže za operon i povećava transkripciju. Lak operon zaista ima pozitivan regulator: Protein aktivatora katabolita, ili KAPA. Držeći korak s proteinima represorima, CAP ima vlastiti efektorski molekul: ciklički AMP ili cAMP.

cAMP proizvodi E. coli kao metabolički nusprodukt u slučaju nedostatka glukoze. Veže se za alosterično mjesto na CAP-u, aktivirajući protein i formirajući ono što ćemo nazvati cAMP-CAP kompleks. Tako aktiviran, CAP se vezuje za region promotora lac operona, odmah uzvodno od mesta vezivanja za RNApol. Ovo povećava afinitet promotorske regije za RNApol, što dovodi do velikog povećanja transkripcije lac operona (slika 2). Bez kompleksa cAMP-CAP, lac operon se i dalje transkribira u prisutnosti laktoze, ali znatno sporijim tempom.

Slika 2: cAMP-CAP kompleks

Sada bismo se mogli zapitati, ako lak operon već ima negativni regulator, zašto mu je potreban i pozitivan regulator? Na kraju, sve se svodi na efikasnost. E. coli su efikasniji u varenju glukoze od laktoze, tako da kada je glukoze u izobilju, rasipno je transkribovati enzime lac operona. Najefikasniji regulatorni sistem bio bi onaj koji se aktivira ne samo u prisustvu laktoze, već i u nedostatku glukoze, to postiže kompleks cAMP-CAP.

Testirajte svoje razumijevanje koristeći sljedeći set vježbi:

Strukturni gen kodira proizvod koji ne regulira ekspresiju gena. Primjeri uključuju enzime, strukturne proteine, siRNA itd.

Regulatorni elementi su nekodirajuća područja DNK koja regulišu ekspresiju gena. Mogu sadržavati mjesta vezivanja za enzime polimeraze, transkripcijske faktore, represorske proteine ​​itd.

Disaharid sastavljen od dva monosaharida glukoze i galaktoze.

Jedan mRNA lanac koji sadrži kodirajuće sekvence za više proizvoda. Za svaku kodirajuću sekvencu postoje zasebna mjesta vezivanja ribosoma, što omogućava simultano prevođenje svih sekvenci.

DNK sekvence koje modificiraju ili reguliraju ekspresiju udaljenih gena.

DNK sekvenca koja modifikuje ili kontroliše ekspresiju susednog gena.

Enzim koji prepisuje mRNA koristeći DNK kao šablon

Najčešći oblik gena ili fenotipa koji se nalazi u prirodi

Mjesto vezivanja osim aktivnog mjesta proteina. U enzimu je aktivno mjesto mjesto katalize. U proteinu koji se veže za DNA aktivno mjesto je mjesto vezivanja za DNK.


Šta je lac operon u biologiji?

The lac, ili laktoza, operon nalazi se u E. coli i nekim drugim enteričkim bakterijama. Ovo operon sadrži gene koji kodiraju proteine ​​zadužene za transport laktoza u citosol i probavlja ga u glukozu. Ova glukoza se zatim koristi za proizvodnju energije.

Takođe, šta je operon u biologiji? Operon: Skup gena transkribovan pod kontrolom gena operatora. Tačnije, an operon je segment DNK koji sadrži susjedne gene uključujući strukturne gene, gen operatora i regulatorni gen. An operon stoga je funkcionalna jedinica transkripcije i genetske regulacije.

Šta ovdje znači lac operon?

The lac operon (laktozni operon) je operon potrebne za transport i metabolizam laktoza u Escherichia coli i mnogim drugim entero bakterijama. Genski proizvod lacZ je & beta-galaktozidaza koja se cijepa laktoza, disaharid, u glukozu i galaktozu.

Koja je funkcija Lac A?

Oni se nazivaju lac z, lac y, i lac a. The lac z gen kodira beta-galaktozidazu, lac y gen kodira permeazu, a lac a gen kodira enzim transacetilazu. Zajedno, ti genski proizvodi djeluju na uvoz laktoze u stanice i razgradnju za upotrebu kao izvor hrane.


Šta je t7 promoter?

T7 ekspresijski domaćini, poput sojeva DE3 ili T7 Ekspresni sojevi nose hromozomsku kopiju faga T7 RNA Polimeraza gen, koji je kontroliran lac promoter. Kada se doda induktor, T7 RNA Polimeraza se ekspresuje i postaje posvećena transkripciji gena od interesa.

Slično, šta je promoter? U genetici, a promoter je područje DNK koje dovodi do započinjanja transkripcije određenog gena. Promoteri nalaze se u blizini mjesta početka transkripcije gena, uzvodno na DNK (prema 5 'području osjetilne niti).

Takođe, šta je t7 sistem ekspresije?

The T7 sistem izražavanja omogućava visok nivo izraz od jakog bakteriofaga T7 promoter. Idealan je za ekspresiju topljivih, netoksičnih rekombinantnih proteina u E. coli. The T7 ekspresijski vektori dizajnirani su da olakšaju kloniranje koristeći Gateway & reg tehnologiju i jednostavno pročišćavanje i otkrivanje proteina.

Šta radi t7 RNA polimeraza?

T7 RNA polimeraza. T7 RNA polimeraza (plava) koja proizvodi mRNA (svijetlo-plava) iz dvolančanog uzorka DNK (narančasta). T7 RNA polimeraza je RNA polimeraza iz T7 bakteriofaga koji katalizira stvaranje RNA od DNK u smjeru 5'&rarr 3'.


Regulacija ekspresije gena u prokariota | Gene Regulation

Transkripcija gena je regulirana u bakterijama kroz kompleks gena koji se naziva operon. To su transkripcijske jedinice u kojima je nekoliko gena sa srodnim funkcijama regulirano zajedno. Drugi geni se također javljaju u operonima koji kodiraju regulatorne proteine ​​koji kontroliraju ekspresiju gena. Otvori su klasificirani kao inducibilni ili represivni.

Inducibilni i potisnuti sistem:

Β galaktozidaza u E. coli odgovorna je za hidro & shylizu laktoze u glukozu i galaktozu.

Ako se laktoza ne snabdijeva ćelijama E. coli, prisustvo β galaktozidaze je teško otkriti. Ali čim se doda laktoza, povećava se proizvodnja enzima β galaktozidaze. Enzim pada onoliko brzo koliko se supstrat (laktoza) ukloni.

Takvi enzimi čija se sinteza može inducirati dodavanjem supstrata poznati su kao inducibilni enzimi, a genetski sistem odgovoran za sintezu takvog enzima naziva se inducibilni sistem. Supstrat čiji dodatak izaziva sintezu enzima je induktor.

U nekim drugim slučajevima situacija je obrnuta. Na primjer, kada se aminokiseline ne isporučuju izvana, ćelije E. coli mogu sintetizirati sve enzime potrebne za sintezu različitih aminokiselina. Međutim, ako se doda određena aminokiselina, na primjer, histidin, smanjuje se proizvodnja enzima koji sintetizira histidin.

U takvom sistemu, dodavanjem krajnjeg proizvoda biosinteze i sinteze provjerava se sinteza enzima potrebnih za biosintezu. Takvi enzimi čija se sinteza može provjeriti dodavanjem krajnjeg proizvoda su represivni enzimi, a genetski sistem je poznat kao represivni sistem. Krajnji proizvod čijim se dodatkom proverava sinteza enzima je ko-represor.

Klasa molekula koja se naziva represori nalazi se u stanicama i ti represivi provjeravaju aktivnost gena. Aktivni potiskivač može se učiniti neaktivnim dodavanjem induktora, dok se neaktivni i sramežljivi potiskivač može aktivirati dodavanjem ko-potiskivača.

Operon model:

Hipotezu za objašnjenje indukcije i represije sinteze enzima prvi su predstavili Jacob i Monod. Shema koju oni zastupaju naziva se Operonov model.

Sastoji se od komponenti:

Oni su izravno povezani sintezom staničnih proteina. Oni proizvode mRNA putem transkripcije i određuju redoslijed aminokiselina u sintetiziranim proteinima. Svi strukturni geni pod operonom mogu tvoriti jednu dugu poiicistronsku ili poligensku molekulu mRNA.

Ovo se nalazi u blizini strukturnog gena. Određuje da li će strukturni geni biti potisnuti proteinom repre­ssor, proizvodom regulatornog gena. Operatorski gen je mjesto vezivanja proteina rep & shyssor, posljednji se veže za formu operatora i izbjegava kompleks operator-represor. Kada se represor veže za operatera, ne može doći do transkripcije strukturnih gena.

Ovi geni sintetiziraju represor. Represor može biti ili aktivni represor ili neaktivan represor. Repressor pro & shytein ima jedno aktivno mjesto za prepoznavanje operatera i drugo aktivno mjesto za induktor. U nedostatku proteina induktora, represor se veže za gen ope & shyrator i blokira put RNA poli & shymerase. Dakle, strukturni geni nisu u stanju da transkribiraju mRNA i posljedično ne dolazi do sinteze proteina.

U prisustvu induktora, protein represor se vezuje za induktor i formira kompleks induktor-represor. Represor kada se veže sa induktorom prolazi kroz promjenu i postaje neefikasan i kao rezultat toga ne može se vezati za operatorski gen i moguća je sinteza proteina.

Stvarno mjesto inicijacije transkripcije i šivanja poznato je kao promotorski gen koji se nalazi lijevo od operatorskog gena. Vjeruje se da se RNA polimeraza veže za mjesto promotora i da se kreće s njega.

Effector je mali molekul (šećer ili aminokiselina) koji se može povezati s proteinom regulatorom i odredit će hoće li represor vezati operatora ili ne. U inducibilnom operonu, ovi efektorski molekuli se nazivaju induktori. U represivnom operonu, ovi efektorski molekuli se nazivaju ko-represor.

Inducibilni operon:

Najpoznatiji operon je lac operon. Lak operon vrši i pozitivnu i negativnu kontrolu. Negativna kontrola je u smislu da je operon normalno “na ” ali se čuva “izvan ” genom regulatora, tj. genima nije dozvoljeno da se eksprimiraju osim ako to nije potrebno.

Lac represor vrši negativnu kontrolu. Pozitivna kontrola je ona u kojoj će gen regulatora stimulirati proizvodnju enzima. Protein aktivatora katabolita (CAP) olakšava transkripciju, pa vrši i uskraćuje pozitivnu kontrolu. Dva jedinstvena proteina su stoga uključena u regulaciju lac operona, a to su lac represor i CAP.

Laktoza je molekul disaharida. Da bi se laktoza iskoristila kao izvor ugljika i energije, molekule laktoze moraju se transportirati iz izvanstaničnog okruženja u strop, a zatim podvrgnuti hidrolizi u glukozu i galaktotozu. Ove reakcije kataliziraju tri enzima. Lac operon se sastoji od tri strukturirana i stidljiva gena (lac Z, Y, A) koji kodiraju ova tri enzima (slika 17.2).

lac Z gen - kodovi enzima β galaktozidaze koji razbija laktozu na galaktozu i glukozu

lac Y gen - kodovi permeaze koja prenosi laktozu u ćeliju

gen lac A - kodovi za transacetilazu koji prenose acetilnu grupu iz acetil CoA u galaktozu.

Negativna kontrola lac operona:

lac repres & shysor sintetizira se djelovanjem gena lac I koji se naziva regulatorni gen. Ovaj represor je alosterični protein

(i) To može vezati lac DNK na mjestu operatera, ili

(ii) To se može vezati za induktor.

U nedostatku induktora, mjesto vezivanja DNK represora je funkcionalno. Represorski protein se veže za DNK na mjestu operatera lac lokusa i blokira transkripciju lac gena pomoću RNA polimeraze. Tako je sinhronizacija enzima lac enzima inhibirana (slika 17.3A).

Laktoza nije pravi induktor lac operona. Obavezuje se na represor kako bi povećao svoju povezanost i stidljivost za operatera. S druge strane, vezani protein neaktivnog represora je alolaktoza. Dok β galaktozidaza razlaže laktozu u glukozu i galaktozu, nuspojava mijenja galaktozu u alolaktozu i galaktobiozu.

Ova alolaktoza sprječava antiindukcijski lac I lac lac efekat laktoze. Kada se alolaktoza (induktor) veže za represor, ona mijenja oblik mjesta vezivanja DNK čineći represor neaktivnim i otpuštajući ga sa mjesta operatera. Tako je moguća trans & shycription lac gena.

Pozitivna kontrola lac Operona:

To je dodatni regulatorni mehanizam koji omogućava lac operonu da osjeti prisustvo glukoze, alternativnog i preferiranog izvora energije za laktozu. Ako su i glukoza i laktoza prisutne, ćelije će prvo potrošiti glukozu i neće koristiti energiju cijepanjem laktoze na šećere koji su joj sastavni.

Prisutnost glukoze u stanici isključuje lak operon mehanizmom koji se naziva potiskivanje katabolita, a koji uključuje regulatorni protein nazvan protein aktivator katabolita (CAP). CAP se veže za DNK sekvencu uzvodno od lac promotora i pojačava vezanje i odsjaj RNA polimeraze i transkripcija operona je poboljšana (slika 17.3B).

CAP se vezuje samo u prisustvu derivata ATP-a koji se zove ciklični adenozin monofos išifat (cAMP) na čiji nivoi utiču glukoza. Enzim adenilat ciklaza katalizuje formiranje cAMP i inhibira ga glukoza. Kada je stanica dostupna glukozi, adenilat ciklaza se inhibira, a razine cAMP -a su niske.

Pod ovim uslovima, CAP se ne veže uzvodno od promotora i lac ope & shyron se transkribira na vrlo niskom nivou. Nasuprot tome, kada je glukoza niska, adenilat ciklaza se ne inhibira, cAMP je veći i CAP se veže povećavajući nivo transkripcije iz operona.

Ako su glukoza i laktoza prisutne zajedno, lac operon će se transkribovati samo na niskom nivou. Međutim, kada se glukoza potroši, potiskivanje katabolita će prestati, a transkripcija iz lac operona se povećava dopuštajući potrošnju dostupne laktoze.

Represivni operon:

Trp operon se sastoji od sledećih komponenti:

(i) Strukturni geni (trp E, D, C, B i A):

Ovaj operon sadrži pet strukturnih gena koji kodiraju enzime uključene u biosintezu i šizu aminokiseline triptofana. Geni su eksprimirani kao jedna mRNA transkribovana sa uzvodnog promotora.

(ii) Promotorski gen (trp P):

To je regija promotora koja je mjesto vezivanja za RNA polimerazu.

(iii) Operatorski gen (trp O):

Operatorska regija je vezana za represor.

To je vodeća regija koja se sastoji od 162 nukleotida prije prvog strukturnog gena trp E. Ima četiri regije, regija 1 ima kodon za trip & šitofan, regija 2, 3 i 4 reguliraju sintezu mRNA strukturnih gena.

Ekspresija operona je regulisana nivoom triptofana u ćeliji (slika 17.4). Regu & shylatory gen uzvodno od trp operona kodira protein koji se naziva trp represor. Ovaj protein veže DNK sekvencu koja se naziva trp operator koja se nalazi odmah nizvodno od trp promotora djelomično ga preklapajući.

Kada je triptofan prisutan u ćeliji, on se vezuje za protein represor trp omogućavajući mu da veže sekvencu trp operatora, ometajući vezivanje RNA polimeraze za trp promotor i sprečavajući transkripciju operona.

U nedostatku triptofana, trp represor nije sposoban vezati operaciju trp i transkripcija operona se nastavlja. Triptofan, krajnji proizvod enzima koje kodira trp operon, tako djeluje kao ko-represor s proteinom represorom trp i inhibira vlastitu sintezu inhibicijom krajnjeg produkta.

Atenuacija je alternativni regulacioni mehanizam koji omogućava fino podešavanje i sklanjanje ekspresije trp operona i drugih operona (phe, his, leu, thr operon). Trans & shycribed mRNA sekvenca između trp promo & shytera i prvog trp gena sposobna je formirati ili veliku strukturu matične petlje koja ne utječe na transkripciju ili manju matičnu petlju koja djeluje kao terminator transkripcije (slika 17.5).

Relativni položaj sekvenci ne dopušta stvaranje obje petlje stabljike odjednom. Slabljenje ovisi o činjenici da su transkripcija, preklapanje i translacija povezani, tj. Da se ribosomi vežu za mRNA dok se prepisuju i počinju ih prevoditi u protein.

Vezivanje ribozoma za trp mRNA utiče na to koja od dve stabljične petlje može da se formira i na taj način određuje da li dolazi do terminacije ili ne (slika 17.5).

Kratka kodirajuća regija uzvodno od regije petlje stabla sadrži kodone triptofana koji se prevode prije strukturnih gena. Kada su nivoi triptofana adekvatni, RNA polimeraza transkribuje lidersku regiju usko praćeno ribosomom koji sprečava formiranje veće petlje stabla, omogućavajući petlji termi­nator da formira završnu transkripciju.

Ako tripto­phan nedostaje, transkripcija se pokreće, ali se ne prekida jer ribosom zastaje, RNA polimeraza se kreće naprijed i formira se velika petlja stabla. Formiranje ter & shyminatorske petlje je blokirano i nastavlja se transkripcija operona. Kada je triptofan prisutan na srednjim nivoima, neki transkripti će termirati i shinatirati, a drugi ne.

Slabljenje na taj način omogućava ćeliji da sintetiše triptofan u skladu sa svojim tačnim potrebama. Sve u svemu, trp represor određuje da li je operon uključen ili isključen, a slabljenje određuje koliko je efikasno transkribovan.

Slijed mRNA sugerira da zastoj ribosoma utječe na prekid u atenuatoru. Sposobnost ribosoma da prođe kroz vodeću regiju može kontrolirati prijelaz između ovih struktura. Struktura određuje da li mRNA može pružiti karakteristike potrebne za terminaciju ili ne.

Kada je prisutan triptofan, ribozomi mogu sintetizirati vodeći peptid. Nastavit će duž vodećeg dijela mRNA do UGA kodona, koji se nalazi između regija 1 i 2. Napredovanjem do ove tačke, ribosomi se protežu preko regije 2 i sprječavaju uparivanje baze.

Rezultat je da je regija 3 dostupna za bazni par s regijom 4, stvarajući termi & shynator ukosnicu. U tim uvjetima, stoga, RNA polimeraza završava na atenuatoru.

Međutim, kada nema triptofana, ribo&šizomi pokreću translaciju vodećeg peptida, ali se zaustavljaju na trp kodonima koji se nalaze u regionu 1. Stoga region 1 ne može da se upari sa regionom 2. Ako se to dogodi, čak i dok se sama mRNA nalazi u sintetizirani, regija 2 i 3 bit će uparene prije nego što se regija 4 transkribira.

Ovo tjera regiju 4 da ostane u jednolančanom obliku. U nedostatku terminatora, RNA polimeraza nastavlja transkripciju pored atenuatora.

Ara (arabinoza) operon F. coli con­tains:

(i) Tri strukturna gena (ara A, ara B i ara D) – koji kodiraju tri različita enzima (izomeraza, kinaza, epimeraza) za metabolizam arabinoze tri su strukturirana gena ko-transkribovana na jednoj mRNA.

(ii) Promotorski gen (strLOŠE)- koji pokreće transkripciju.

(iii) Regularni gen (ara C)- regulatorni protein ovog gena ara C.

(iv) Promotorski gen (Pc)- Pokreće transkripciju C.

Dva promotera PLOŠE i Pc nalaze se 100 nukleotidnih parova dalje u istoj regiji induktora i započinju transkripciju u suprotnim smjerovima.

Indukcija ara operona ovisi o pozitivnim regulatornim učincima dva proteina, proteina ara C i CAP -a (proteina aktivatora katabolita koji veže cAMP), mjesta vezanja ova dva proteina nalaze se u regiji zvanoj ara I koja se nalazi između tri strukturna gena (ara B, ara A i ara D) i regulatorni gen (ara C) (slika 17.6A).

Protein ara C djeluje kao negativan regulator (represor) transkripcije strukturnih gena ara B, ara A i ara D iz PLOŠE promotor u odsustvu arabinoze i cikličkog AMP (cAMP). Ali djeluje kao pozitivan regulator (aktivator) transkripcije ovih gena iz PLOŠE promotor kada su prisutne arabinoza i cAMP.

U zavisnosti od prisustva ili odsustva efektorskih molekula kao što su arabinoza i cAMP, ara C regulatorni genski proizvod može imati pozitivan ili negativan efekat na transkripciju ara B, ara A i ara D strukturnih gena (slika 17.6B).

Post-transkripcijska regulacija ekspresije gena u prokariota:

Regulacija gena se također može pojaviti kod prokariota u vrijeme translacije.

Autogena regulacija prevođenja:

Postoji niz primjera gdje protein ili RNK regulira vlastitu proizvodnju. Nekoliko proteina djeluje kao represori, vežu se za mjesto vezivanja ribosoma (ili SD-Shine-Dalgarno sekvencu) ili inicijacijski kodon mRNA. U ovim slučajevima mRNA ostaje netaknuta, ali se ne može prevesti. Postoje neki drugi sistemi u kojima se mRNA može razgraditi vezivanjem proteina na kratke specifične sekvence mRNA.

Regulacija pomoću RNA protiv čula:

Translacijska kontrola sinteze proteina može se provesti korištenjem RNA koja je komplementarna mRNA, te će komplementarne RNA formirati hibride RNA-mRNA i spriječiti translaciju mRNA. Ove vrste RNK se nazivaju antisens RNA ili micRNA (mic = mRNA interferirajuća komplementarna RNA).

Represija nad prevođenjem:

Potiskivanje prijevoda događa se na sljedeće načine:

(a) Molekul represor-efektor može prepoznati i shinizovati i vezati se za određenu sekvencu ili za specifičnu sekundarnu strukturu (koja uključuje SD regiju i AUG kodon), blokirajući na taj način početak translacije blokirajući ribosomalnu vezujuću i sjajnu regiju.

(b) Molekul represor-efektor može se vezati za operatora (ne uključuje SD regiju i AUG kodon) čime se stabilizira inhibitorna sekundarna struktura mRNA.

(c) Efektorski molekul (endonukleaza) može inhibirati inicijaciju translacije endonukleolitičkim cijepanjem SD regije.

Aktivacija prevođenja:

Neki pozitivni efektori ili aktivatori uzrokuju aktivaciju transšilacije destabilizacijom inhibitornih sekundarnih struktura u mRNA bilo jednostavnim vezanjem i šivanjem ili endonukleolitičkim cijepanjem. Na translaciju određenih gena mogu utjecati neki drugi geni – fenomen se naziva trans & shylational coupling.

U nekim slučajevima, krajnji proizvod određenog puta biosinteze se akumulira i ta akumulacija može zaustaviti dalju sintezu ove supstance. Krajnji proizvod djeluje kroz alosteričku transformaciju prvog enzima biosintetskog puta (slika 17.7).


Art Connection

Regulacija lac operon. Transkripcija lac operon je pažljivo reguliran tako da se njegova ekspresija javlja samo kada je glukoza ograničena i laktoza je prisutna da služi kao alternativni izvor goriva.

Pitanje: In E. coli, the trp operon je podrazumevano uključen, dok je lac operon je isključen. Zašto mislite da je to tako?

Ako je prisutna glukoza, tada se CAP ne uspijeva vezati za promotorsku sekvencu kako bi aktivirao transkripciju. Ako nema laktoze, represor se veže za operatora kako bi spriječio transkripciju. Ako je bilo koji od ovih uvjeta ispunjen, transkripcija ostaje isključena. Samo kada je glukoza odsutna, a laktoza prisutna lac operon transkribovan (Tabela).

Signali koji indukuju ili potiskuju transkripciju lac Operon
GlukozaCAP se vezujeLaktozaRepresor se veže Transkripcija
+--+Ne
+-+-Neki
-+-+Ne
-++-Da


DMCA žalba

Ako smatrate da sadržaj dostupan putem web stranice (kao što je definirano u našim Uvjetima pružanja usluge) krši jedno ili više vaših autorskih prava, obavijestite nas davanjem pisanog obavještenja (“Obavijest o kršenju”) koje sadrži dolje opisane informacije određenom agent naveden ispod. Ako Varsity Tutori poduzmu mjere kao odgovor na Obavijest o povredi prava, dobronamjerno će pokušati kontaktirati stranu koja je učinila takav sadržaj dostupnim putem najnovije adrese e -pošte, ako postoji, koju je ta strana dostavila Varsity Tutorima.

Vaše Obavještenje o kršenju može se proslijediti strani koja je sadržaj učinila dostupnim ili trećim stranama kao što je ChillingEffects.org.

Imajte na umu da ćete biti odgovorni za štetu (uključujući troškove i odvjetničke naknade) ako materijalno pogrešno predstavite da proizvod ili aktivnost krše vaša autorska prava. Stoga, ako niste sigurni da sadržaj koji se nalazi na web-mjestu ili je povezan s njim krši vaša autorska prava, trebali biste prvo razmisliti o tome da kontaktirate advokata.

Slijedite ove korake da biste poslali obavijest:

Morate uključiti sljedeće:

Fizički ili elektronički potpis vlasnika autorskih prava ili osobe ovlaštene da djeluje u njihovo ime Identifikacija autorskih prava za koja se tvrdi da su povrijeđena Opis prirode i tačna lokacija sadržaja za koji tvrdite da krši vaša autorska prava, u dovoljnom broju detalji koji omogućuju nastavnicima Varsityja da pronađu i pozitivno identificiraju taj sadržaj, na primjer, potrebna nam je veza do određenog pitanja (ne samo naziv pitanja) koja sadrži sadržaj i opis koji određeni dio pitanja - slika, link, tekst itd. - vaša žalba se odnosi na vaše ime, adresu, broj telefona i adresu e -pošte i vašu izjavu: (a) da vjerujete u dobroj vjeri da je upotreba sadržaja za koju tvrdite da krši vaša autorska prava nije ovlašten zakonom, ili vlasnikom autorskih prava ili zastupnikom takvog vlasnika (b) da su svi podaci sadržani u vašem Obavještenju o povredi tačni, i (c) pod prijetnjom krivotvorenja, da ste vlasnik autorskih prava ili osoba ovlaštena da djeluje u njihovo ime.

Pošaljite žalbu našem imenovanom agentu na:

Charles Cohn Varsity Tutors LLC
101 S. Hanley Rd, apartman 300
St. Louis, MO 63105


Pogledajte video: Лактозный оперон - что такое. Пример регуляции активности генов. (Decembar 2022).