Informacije

Kako spriječiti da se stara regija promotora pričvrsti na plazmid umjesto novog tokom ligacije?

Kako spriječiti da se stara regija promotora pričvrsti na plazmid umjesto novog tokom ligacije?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Ono što pokušavam je izvaditi postojeću promotorsku regiju u plazmid i zamijeniti je novom. Zato prvo koristim odgovarajuće restrikcijske enzime kako bih se riješio postojeće promotorske regije. Zatim dodajem novi fragment promotora koji ima odgovarajuće ljepljive krajeve, a zatim kroz ligaciju želim postaviti novi promotor u plazmid.

Budući da će stara regija promotora i nova regija promotora imati iste "ljepljive krajeve", kako mogu spriječiti da se stara regija promotora stavi u plazmid umjesto u novu tijekom ligacije?


  1. Ispraznite ga na gel nakon probave i izvadite samo vektor.

  2. Tretirajte fosfatazom nakon probave. Ovo će spriječiti religaciju jer vam je potreban barem jedan od vaših fragmenata da bude fosforiliran da bi ligacija funkcionirala.

  3. (Mora bez obzira) niz nekoliko kolonija na kraju.

Preporučujem da radite sve tri.

Uredi: opcija 4: probavi s trećim enzimom koji ubacuje tvoj stari promotor, ali ne i vektor ili novi promotor.


Pogledajte video: Как си изчистих акнето за 30 дни! (Decembar 2022).